Berikut adalah ikhtisar dari langkah-langkah yang berbeda dari protokol pewarnaan imunofluoresensi tidak langsung
- Perencanaan Percobaan dan Persiapan Sampel. …
- Contoh Fiksasi. …
- Permeabilisasi Sel. …
- Pemblokiran. …
- Inkubasi Antibodi Primer. …
- Inkubasi Antibodi Sekunder. …
- Counterstain dan Mounting.
Bagaimana Anda melakukan imunofluoresensi?
Semua langkah inkubasi berlangsung pada suhu kamar
- Cuci sel dua kali dan gunakan pinset untuk menempatkan kaca penutup dengan sel terbalik dengan hati-hati ke dalam ruang yang dilembabkan.
- Perbaiki dengan 4% formaldehida selama 10 menit dan cuci 3 ×.
- Permeabilisasi dengan 0,1 % TX-100/PBS selama 15-20 menit dan cuci 3 ×.
Bagaimana Anda menggunakan imunofluoresensi dalam sel?
Protokol imunofluoresensi untuk sel yang melekat
- Biji 1-1,5 x104 sel per sumur dari slide 4 ruang dalam 500 mL media kultur. Inkubasi pada 37°C pada 5% CO2.
- 32–36 jam pasca penyemaian sel, keluarkan media kultur sel dan bilas sel 3 kali menggunakan 500 L 1X PBS.
Apa contoh imunofluoresensi?
Misalnya, seorang peneliti dapat membuat antibodi primer pada kambing yang mengenali beberapa antigen, dan kemudian menggunakan antibodi sekunder kelinci yang digabungkan dengan pewarna yang mengenali daerah konstanta antibodi kambing ( antibodi anti-kambing kelinci).
Apa gunanya pewarnaan imunofluoresensi?
Pewarnaan
Immunofluorescence (IF) adalah teknik yang banyak digunakan dalam penelitian biologi dan diagnostik klinis JIKA menggunakan antibodi berlabel fluoresen untuk mendeteksi antigen target spesifik. Diikuti dengan pencitraan, ini adalah teknik yang sangat langsung karena Anda benar-benar dapat melihat sesuatu.