Logo id.boatexistence.com

Mengapa sel yang kompeten harus disimpan di dalam es?

Daftar Isi:

Mengapa sel yang kompeten harus disimpan di dalam es?
Mengapa sel yang kompeten harus disimpan di dalam es?

Video: Mengapa sel yang kompeten harus disimpan di dalam es?

Video: Mengapa sel yang kompeten harus disimpan di dalam es?
Video: TIPS DAN TRIK KOMPETEN UJI KOMPETENSI SKEMA SAK ETAP 2024, Mungkin
Anonim

Tetap DINGIN! Proses pembuatan sel yang kompeten cukup menantang karena kebutuhan sel untuk tetap dingin. Ini penting karena sel sangat sensitif dan rapuh saat dibuat kompeten Menjaga suhu tetap rendah membantu menghindari kematian sel selama pemrosesan.

Mengapa reaksi disimpan dalam es selama percobaan transformasi?

Campuran sel plasmid kemudian dipanaskan sebentar hingga 45–50 °C, memungkinkan DNA memasuki sel melalui membran yang terganggu. Campuran dipanaskan kemudian ditempatkan kembali di atas es untuk mempertahankan plasmid di dalam bakteri … Jika larutan DNA plasmid memiliki terlalu banyak garam di dalamnya, busur dapat terjadi, mengganggu transformasi.

Mengapa Anda meletakkan tabung di atas es?

Menurutmu mengapa kita menaruh tabung di atas es? Untuk memasukkan DNA ke dalam bakteri, kita harus melubangi mereka dengan bahan kimia kalsium klorida (CaCl2). … Lubang-lubang itu dilubangi untuk memungkinkan DNA di dalam daun bakteri bocor. Jika kita tidak menyimpannya di dalam es, mereka akan 'berdarah' sampai mati.

Apa peran kalsium klorida sedingin es dalam penyiapan sel kompeten?

Proses transformasi heat-shock kalsium klorida mendorong sel bakteri untuk mengambil DNA dari lingkungan sekitarnya. … Larutan CaCl2 sedingin es memfasilitasi pengikatan DNA ke permukaan sel, yang kemudian masuk ke dalam sel setelah kejutan panas dalam waktu singkat (3).

Bagaimana Anda menyimpan sel yang kompeten?

Sel yang kompeten harus disimpan pada - 80 °C. Penyimpanan pada -20 °C akan menghasilkan penurunan efisiensi transformasi (TE) yang signifikan. Saat diuji pada NEB 5-alpha Competent E. coli (NEB C2987H), sel kehilangan 94,5% TE setelah hanya 24 jam penyimpanan pada -20°C.

Direkomendasikan: